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把握好這個關鍵點,支原體檢測更準確
點擊次數:122 發布時間:2022-12-28

通常,如果懷疑細胞有支原體污染,可直接取細胞上清進行支原體PCR檢測。因為存在支原體污染的細胞上清中,支原體密度為通常為10^6-10^8個/ml,已足以用于PCR檢測。

Minerva公司生產的支原體PCR試劑盒靈敏度高,特異性好,檢測的支原體種類多,很受用戶的歡迎。

但有時,支原體檢測前,還需對樣品中的支原體DNA進行提取。那么,什么時候需要提取呢?

崢嶸歲月,初心不改

當出現以下幾種情況時,建議大家在進行支原體qPCR前,先進行提取支原體提取。

1、細胞培養液中存在抑制PCR的物質,這時就需要提取。細胞培養基中的血清濃度如果超過12%,那么對下游的PCR反應會產生抑制。酚紅,對熒光定量PCR的檢測也會干擾。這些均可以通過使用Miverva公司的支原體DNA提取試劑盒來克服。

2、對于樣品類型是細胞團、疫苗、凍存細胞和石蠟包埋的組織,也需要提前提取DNA。

3、另外,如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml,則先需要用蛋白酶K進行處理。

好物推薦

Minerva

Venor®GeM Sample Preparation Kit

貨號:56-1010

該試劑盒可從細胞上清和生物制品中分離支原體DNA,全程只需30分鐘。該試劑盒符合歐洲藥典規范。

分四步組成:

細胞溶解

DNA特異性與層析柱結合

祛除殘留的污染物和抑制劑

洗脫DNA。

需要注意的是,常規細菌和哺乳動物細胞的DNA提取試劑盒是否能用于支原體DNA提取,值得懷疑。因為如果都提取出來,則會對下游PCR檢測帶來干擾??傊?,提取后的DNA應具有一定的純度和產率


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