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支原體qPCR檢測的儀器設置和注意事項
點擊次數:121 發布時間:2022-12-28

目前在市場上,有一款支原體qPCR檢測試劑盒(英文品名:Venor®Gem qEP,廠家:德國MB) 廣受藥廠的歡迎。

該試劑盒經過全面的方法學驗證,符合歐洲藥典和日本藥典要求,適合細胞治療、CAR-T、抗體藥、疫苗等藥廠的過程控制、放行檢測以及臨床申報。要用好該試劑盒,除了嚴格遵循說明書的操作外,還有些注意事項,下面小編向您介紹一下。

一、儀器的設置

要注意你所用的qPCR儀有幾個通道,是否可檢測相應的熒光素。

MB的支原體qPCR檢測試劑盒(英文名:Venor®Gem qEP)適用的熒光定量PCR儀的機型廣泛,相關設置可從締一生物網站下載。


二、基線設置

許多qPCR儀軟件有自動基線設置功能。

但要注意,有時也需要查看原始熒光數據,了解各個樣本的基線水平。

如下圖圖1,有一些樣本的基線水平較高,就提示這些樣本可能存在一定的數據偏差或操作錯誤。

圖1. 基線校正前的曲線

三、閾值設置

許多qPCR儀軟件有自動閾值設置功能。但也應關注一下,儀器自動設定的閾值線是否合適。這需要一定的經驗。

如果閾值設定太低,會使靈敏度**化,增加假陽性的可能;

如果閾值設定太高,可能會影響靈敏度并導致假陰性。

圖2和圖3就是一個例子。

圖2. ABI 7500自動閾值的設定。

圖3. ABI 7500手動閾值的設定(熒光**值的5%)

在圖2中,有2個樣本為支原體陽性(黃線和紅線)。

在圖3中,這2個樣本中有一個變為陰性了(紅線)。

總之,閾值設定,如果是軟件自動設置,應再看一下閾值線的位置是否合適。必要時可進行手動設置。


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